本研究使用来自多个患者的几个胶质母细胞瘤组织，这些组织在几个不同的环境中获得：在贝伐单抗疗法后切除的几个肿瘤，多个初始胶质母细胞瘤组和几个贝伐单抗后复发肿瘤。贝伐单抗治疗后切除的多个肿瘤是在术前给予贝伐单抗后几次剂量切除的肿瘤，用于更安全的手术切除或临床过程的结果，以及包括参加新辅助贝伐单抗二期研究的几个肿瘤。在最后一次贝伐单抗处理后多天进行肿瘤切除。级例患者中的几例是新诊断的病例。一名患者在肿瘤复发时用贝伐单抗治疗，并且在贝伐单抗功效下进行切除。有效贝伐单抗组的多名患者中有几名患有复发性疾病。在这些多例患者，手术切除的肿瘤复发，并从一例得到尸检组织。因此，新辅助贝伐单抗治疗后几例难治性贝伐单抗组肿瘤复发。在每个初始和难治性贝伐单抗组中的个肿瘤是从几名患者获得的贝伐单抗治疗前后的配对样品。多名患者中有五个与放疗加伴随和替莫唑胺佐剂贝伐单抗在初始切除后，其他几名患者在方案后肿瘤复发时用贝伐单抗治疗。尽管对贝伐单抗有初步反应，但所有几例复发性肿瘤均对贝伐单抗无效，切除复发性肿瘤，另外几例死后。切除死亡与最后一次贝伐单抗治疗之间的间隔为多天。
　　 本研究表明，在贝伐单抗疗法评估中，使用种不同环境切除的人胶质母细胞瘤标本，贝伐单抗下调免疫检查点分子的表达，并减少免疫抑制性的数量。此外，贝伐单抗疗法在数值上增加了细胞毒性细胞的浸润。这些结果在很大程度上通过比较从几名患者获得的成对的前贝伐单抗初始和后贝伐单抗复发肿瘤得到证实。重要的是，肿瘤免疫中关键分子细胞的这些变化在最初的贝伐单抗治疗后立即开始，并且在长期贝伐单抗治疗期间持续存在，甚至在贝伐单抗难治的复发性肿瘤中也是如此。血管内皮生长因子通过抑制的成熟来促进免疫抑制性肿瘤微环境的一些以前的研究表明，血管内皮生长因子途径的抑制在抗肿瘤免疫应答提供了有利的肿瘤微环境。然而，这是第一项基于使用人类标本的证据显示肿瘤免疫中关键分子细胞与抗血管生成治疗相关的整体情况的研究。此外，它首次揭示了这种现象在长期贝伐单抗疗法中持续存在。程序性细胞死亡配体经常在的肿瘤细胞中在胶质母细胞瘤中表达。以前的研究表明，高程序性细胞死亡配体表达与患者的成胶质细胞瘤恶化总生存期相关。然而，到目前为止，还没有研究报道抗血管生成治疗下程序性细胞死亡配体表达的变化。本研究首次表明，与幼稚贝伐单抗组相比，有效和难治性贝伐单抗组程序性细胞死亡配体肿瘤细胞减少。重要的是，程序性细胞死亡配体的下调甚至在贝伐单抗难治的肿瘤中也是持久的，这表明连续的贝伐单抗治疗可以在延长的时间内调节程序性细胞死亡配体的表达。这种现象可归因于抑制血管内皮生长因子依赖性程序性细胞死亡配体上调。此外，在贝伐单抗之下或之后抑制免疫抑制细胞也可能导致表达程序性细胞死亡配体的肿瘤细胞百分比降低。
　　 一些先前的研究报道了在血管内皮生长因子抑制下诱导细胞。表明用抗血管内皮生长因子抗体治疗导致肿瘤特异性增加和小鼠乳腺肿瘤消退。评估了用血管内皮生长因子抑制剂治疗的复发性胶质母细胞瘤患者，并报道了阿西替尼可增加幼稚细胞和中枢记忆细胞的数量。抗程序性细胞死亡配体和贝伐单抗通过血管正常化和内皮细胞活化在转移性肾细胞癌中增加肿瘤内细胞的组合。调节性细胞产生转化生长因子颗粒酶，其引发细胞毒性细胞的凋亡。因此，通过调节性细胞免疫抑制是与癌症免疫疗法的失败也显示调节性细胞的化疗各种癌症中被诱导。快速的增加被称为回弹现象，长期替莫唑胺治疗胶质母细胞瘤中的人口。一些研究调查了抗血管生成治疗下的状态。流式细胞术分析显示，转移性结直肠癌患者和用抗血管生成疗法治疗的肾癌患者外周血中比例下降，包括贝伐单抗，索拉非尼和舒尼替尼。在本研究中，与幼稚贝伐单抗组相比，有效和难治性贝伐单抗组中的数量显着减少。这是第一项显示在抗血管生成治疗下在肿瘤中下调的研究，连续贝伐单抗治疗可能长期持续调节即使在连续贝伐单抗治疗后的复发肿瘤中也是如此。
　　 与初始肿瘤相比，胶质母细胞瘤含有比较低级别神经胶质瘤更多的程序性细胞死亡程序性细胞死亡表达在复发肿瘤中显着增加。细胞表达程序性细胞死亡也示于人脑胶质瘤组织中富集。程序性细胞死亡的表达在与血管内皮生长因子曝光和血管内皮生长因子的阻挡相关联血管内皮生长因子途径下调这些细胞上程序性细胞死亡的表达的频率。在本研究中，与幼稚贝伐单抗组相比，有效或难治性贝伐单抗组中程序性细胞死亡细胞的总数显着减少。尽管在贝伐单抗治疗后很难分辨哪些细胞程序性细胞死亡表达，但整体程序性细胞死亡表达的降低表明血管内皮生长因子途径的抑制在免疫功能中提供了有利的微环境。在对血管内皮生长因子抑制剂有抗性后，胶质母细胞瘤患者细胞上的和程序性细胞死亡表达显着增加。差异和他们研究与研究人员之间复发阶段程序性细胞死亡状态的原因仍不清楚;然而，这可能归因于与肿瘤之间状态的差异或抑制目标血管内皮生长因子与血管内皮生长因子相比的差异。